CRISPR/Cas9系统在基因组编辑中的优化与发展
滕小龙, 史硕博

Optimization and development of CRISPR/Cas9 systems for genome editing
TENG Xiaolong, SHI Shuobo
表3 多重CRISPR/Cas9系统应用研究
Table 3 Research on the applications of the multiplexed CRISPR/Cas9 system
宿主细胞多重CRISPR策略靶向目标数量应用/概念验证参考文献
哺乳动物细胞2个间隔区通过天然CRISPR序列自我加工2个靶标(1个基因)对1个靶基因敲除,效率为1.6%[4]
酿酒酵母Casy4核酸酶加工3个基因同时对3个不同启动子进行激活,使得3个报告基因荧光强度提升了2倍[113]
酿酒酵母基于Csy4核酸酶加工的多gRNA快速组装12个靶标(3个基因)通过12个gRNA靶向使得3个报告基因荧光强度分别被抑制了92%、81%和95%[114]
酿酒酵母基于tRNA转录本切割机制的多gRNA表达系统8个基因通过两轮8个基因的敲除获得了30倍的游离脂肪酸产量[115]
酿酒酵母多个gRNA表达盒通过pol Ⅲ启动子启动3个基因将适配子与gRNA融合进行多基因调控,获得了不同的紫罗兰素生物合成产物[118]
酿酒酵母基于Csy4核酸酶加工的多gRNA快速组装策略及多Cas9正交组合调控3个基因通过组合调控使两个报告基因表达分别被抑制和激活5倍,同时以95%的效率敲除第三个基因[119]
酿酒酵母通过质粒表达多个gRNA表达盒以及截短gRNA用于调控3个基因通过对三个基因分别进行编辑、激活和抑制获得了α-檀香烯2.66倍的产量[43]
马克思克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)基于tRNA转录本切割机制的多gRNA表达系统6个靶标(4个基因)通过对4个基因进行调控,使乙酸乙酯的产量提升了3.8倍[120]
大肠杆菌多个gRNA表达盒通过质粒表达3个基因通过对3个基因进行组合调控得到了2.3倍苹果酸产量菌株[121]
大肠杆菌多个gRNA表达盒通过质粒表达3个基因对苹果酸合成途径基因进行组合调控后获得了2.3倍苹果酸产量菌株[121]
枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)多个gRNA表达盒整合至基因组3个基因通过多基因动态组合调控提高了N-乙酰葡糖胺产量[122]
天蓝色链霉菌(Streptomyces coelicolor)多个gRNA表达盒与dCas9在质粒上表达4个基因通过对4个靶基因同时进行抑制,使其mRNA表达量降为对照的2%~32%[123]