合成生物学视角下的基因功能探索与酵母工程菌株文库构建
Gene function exploration and engineering strain library construction from a synthetic biology perspective
（本图由biorender绘制）
（a）双突变体筛选策略。两种交配型的细胞分别在各自的突变位点携带不同抗性标签KanMX（绿色空心圆点）和NatMX（粉色空心圆点）用于筛选双突变体子代（黑线框细胞）。YFG （your favourite gene） ：目的基因。（b）反二倍体筛选策略。含有野生型CAN1基因的单倍体细胞（蓝色细胞，a型）或二倍体细胞（紫色细胞）会摄入有毒的刀豆氨酸（canavanine），从而被杀死，而can1Δ突变体无法将刀豆氨酸运转入体内，因此能够存活（黑线框细胞）。（c）单倍体筛选策略。在某一细胞型的母本菌株中，构建另一细胞型特异性启动子与营养缺陷筛选标签的表达盒，用于选择任一性别的单倍体子代细胞。例如在a型细胞（蓝色）中，携带只能在α型细胞中表达的STE3pr-LEU2基因线路（红色实心圆点），只有细胞交配使STE3pr-LEU2基因线路存在于α型细胞中时，该细胞存活（含有红色实心圆点的红线框细胞）。（d）反二倍体与单倍体筛选共实现。通过将一个显性致死的抗性基因cyhS（棕色实心方块）“镶嵌”在裂殖酵母交配位点mat1（在蓝色的h-细胞中为蓝色方块表示的matP）附近，使得某一单倍体表型与抗性基因的表达偶联（matP-cyhS ）。
(created by biorender)
