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改善甲酸利用微生物细胞生长的关键方法
（a）实验室适应性进化；（b）强化甲酸营养型微生物的细胞生长；（c）提高微生物协同利用甲酸的能力
提高甲酸同化效率的关键方法
（a）优化路径基因；（b）路径关键酶改造；（c）阻断竞争路径；（d）辅因子再生；（e）模块化工程（FDH—甲酸脱氢酶；H_int—H蛋白的氨甲基化形式；H_ox—H蛋白的氧化形式；H_red—H蛋白的还原形式；TCA cycle—三羧酸循环；THF—四氢叶酸）
人工设计甲酸利用路径
（a）甲醛酶途径；（b）合成乙酰辅酶A途径（Acdh—乙醛脱氢酶；Acs—乙酰辅酶A合成酶；Acps—乙酰磷酸合成酶；Dhak—二羟基丙酮激酶；Fls—甲醛酶；Gals—乙醇醛合成酶；Pta—磷酸转乙酰酶；绿色底色的化合物为路径底物，粉色底色的化合物为路径产物）
rTHF-rgcv途径的路径酶来源
重构优化甲酸利用路径
（a）重构的卡尔文循环；（b）改良的丝氨酸循环；（c）高丝氨酸循环；（d）重组 THF 循环-反向甘氨酸裂解途径（Acdh—乙醛脱氢酶；Acs—乙酰辅酶A合成酶；Agt—丙氨酸-乙醛酸转氨酶；CA—碳酸酐酶；Faldh—甲醛脱氢酶；Fch—次甲基四氢叶酸环水解酶；Fdh—甲酸脱氢酶；Fthfl—甲酸四氢叶酸连接酶；Ftl—甲酸四氢叶酸连接酶；GCS—甘氨酸裂解系统；Gldh—谷氨酸脱氢酶；GlyA—丝氨酸羟甲基转移酶；Gpt—谷氨酸-丙酮酸转氨酶；Hal—HOB醛缩酶；Hat—HOB转氨酶；Hsk—高丝氨酸激酶；Lta—苏氨酸醛缩酶；Madh—苹果酸脱氢酶；Mcl—苹果酰辅酶A裂解酶；Medh—甲醇脱氢酶；Mtd—亚甲基四氢叶酸脱氢酶；Mthfs—5，10-亚甲基四氢叶酸合成酶；Mtk—苹果酸硫激酶；Oxidative PPP—氧化戊糖磷酸途径；Pfk—磷酸果糖激酶；Ppc—PEP羧化酶；Pps—PEP合成酶；Prk—磷酸核酮糖激酶；Rubisco—核酮糖-1，5-二磷酸羧化酶；Sal—丝氨酸醛缩酶；Sda—丝氨酸脱氨酶；THF—四氢叶酸；Ts—苏氨酸合成酶；Zwf—6-磷酸葡萄糖脱氢酶；绿色底色的化合物为路径底物，粉色底色的化合物为路径产物）
天然甲酸利用路径
（a）还原性磷酸戊糖循环；（b）丝氨酸循环；（c）还原性乙酰辅酶A途径；（d）还原性甘氨酸途径（Ack—乙酸激酶；Acs—乙酰辅酶A合成酶；COdh—CO脱氢酶；CoFeSP—钴铁硫蛋白；Eno—烯醇化酶；Fch—次甲基四氢叶酸环水解酶；Fdh—甲酸脱氢酶；Ftl—甲酸四氢叶酸连接酶；Fts—甲酰四氢叶酸合成酶；Gapdh—3-磷酸甘油醛脱氢酶；GCS—甘氨酸裂解系统；Gk—甘油酸激酶；GlyA—丝氨酸羟甲基转移酶；GR—甘氨酸还原酶复合体；Hpr—羟基丙酮还原酶；Madh—苹果酸脱氢酶；Mcl—苹果酰辅酶 A 裂解酶；Metr—甲基转移酶；Mtd—亚甲基四氢叶酸脱氢酶；Mtk—苹果酸裂解酶；Mtr—亚甲基四氢叶酸还原酶；PFOR—丙酮酸铁氧还蛋白氧化还原酶；Pgk—磷酸甘油酸激酶；Ppc—PEP羧化酶；Prk—磷酸核酮糖激酶；Rubisco—核酮糖-1，5-二磷酸羧化酶/加氧酶；Sda—丝氨酸脱氨酶；Sgt—丝氨酸-乙醛酸转氨酶；THF—四氢叶酸；绿色底色的化合物为路径底物，粉色底色的化合物为路径产物）
代谢工程改造的微生物
代谢工程改造的微生物
（a）大肠杆菌^［56］；（b）酿酒酵母；（c）巴斯德毕赤酵母；（d）恶臭假单胞菌（P _AOX1 —醇氧化酶启动子；THF—四氢叶酸）
天然甲酸利用微生物
天然甲酸利用微生物
（a）产乙酸菌；（b）产甲烷菌；（c）硫酸盐还原菌；（d）甲基杆菌；（e）还原性磷酸戊糖循环依赖型微生物（CBB cycle—Calvin-Benson-Bassham循环；THF—四氢叶酸；THMPT—四氢甲基蝶呤）
不同表达体系生产胶原蛋白成本及优缺点
不同表达体系产生胶原蛋白含量及种类
胶原蛋白合成机制图^{［26，41］}
（首先胶原蛋白 α 链经内质网中P4H酶以及LH酶的作用下实现羟基化，随后，三条胶原蛋白 α 单链的C端前肽在内质网膜凝集素样分子伴侣、钙联蛋白和内质网氧化还原酶PDI的协同作用下形成二硫键。HSP47能有效防止前胶原蛋白局部展开和聚集形成。最后，前胶原蛋白经高尔基体运送至细胞质基质利用N端酶与C端酶将多余N端与C端进行切除，形成完整的胶原蛋白结构。符号：P—脯氨酸残基；K—赖氨酸残基；P4H—脯氨酰4-羟化酶；LH—赖氨酰羟化酶；P3H1—脯氨酰3-羟化酶；HSP47—热休克蛋白47；PDI—二硫异构酶；FKPB65—免疫亲蛋白；PNP—原胶原N端酶；PCP—原胶原C端酶）
胶原蛋白类型、分布及功能^{［23，30］}
胶原蛋白结构^［20］
（胶原蛋白一级结构展示了胶原蛋白主要由脯氨酸、甘氨酸以及羟脯氨酸等氨基酸构成；二级结构则展示了脯氨酸、甘氨酸以及羟脯氨酸等氨基酸通过α螺旋使胶原蛋白二级结构趋于稳定；三级结构展示了三条α链经过左手螺旋构象形成原胶原。）
基于FlowRACS单细胞拉曼表型检测分选的应用
基于FlowRACS的单细胞拉曼表型检测分选装备及分选流程
基于EasySort的单细胞拉曼表型检测分选装备及分选流程
基于RACS-Seq的单细胞拉曼分选应用
基于RACS-Seq的单细胞拉曼表型检测分选装备及分选流程

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